a Rosa26 Kopogtató egér hasznossága

 mi a rosa 26 Kopogtató

mi a rosa 26 knock-in

a rosa26 lókusz az egér genomjában egy “biztonságos kikötő”, amely lehetővé teszi a kutatók számára, hogy kifejezzék az érdekes géneket. Különböző géncélzási technológiákat (embrionális őssejtek; CRISPR) alkalmaznak specifikus DNS-inszerciók készítésére a Rosa26 lókuszon. Megvitatják a tudósok számára a Rosa26 használatának indoklását és az ilyen típusú egér genetikai modell használatának egyéb kulcsfontosságú előnyeit.

mi a Rosa26 lokusz?

az 1990-es évek elején a kutatók izolálták a Rosa26-ot, így a tudósok egy speciális helyet kaptak a gének beillesztésére a tanulmányozáshoz. Ezt megelőzően a genetikusok transzgenikus egérmodelleket használtak a hipotézisek tesztelésére. A transzgenikus egereket úgy állítják elő, hogy plazmid DNS-t injektálnak egy pronucleusba. A transzgenezis egyik korlátja, hogy a plazmid DNS véletlenszerűen integrálódik az egér genomjába.

tudományosan GtROSA26 néven emlegetik, ez a lókusz az egerek 6.kromoszómáján található. Egy nem lényeges RNS-t kódol, amely az egész testben replikálódik, és a test minden sejtjét/szövetét, amely kifejezi. Ezért ez a lokusz hasznos helyet biztosít a génbeillesztések készítéséhez és annak tanulmányozásához, hogy a fehérjék hogyan hatnak az egész testre.

a tudósok kezdetben ezt a vonalat hozták létre embrionális őssejt retrovírus gén csapdába ejtésével. A tudósok olyan embrionális őssejteket azonosítottak, amelyek ezt provirális másolatként tartalmazták, és blasztocisztákba injektálták őket. A kutatók elválasztották azokat az egereket, amelyekben a Rosa26 beillesztésre került a jövőbeni vizsgálathoz. Egyetlen sejtnek sem volt natív vektora a Gen–Rosa Adapgeo, amely megkövetelte a tudósoktól, hogy a semmiből hozzák létre a szükségeseket.

a géncélzás előtt a kutatók transzgenikus egereket hoztak létre. Ezt úgy valósítottuk meg, hogy plazmid DNS — t-transzgént-injektáltunk az egér pronucleusába. Ennek a módszernek az egyik hátránya, hogy a transzgén véletlenszerűen integrálódik az egér genomjába. Ezzel szemben a géncélzás lehetővé teszi a tudósok számára, hogy vagy “kiüssenek” egy érdekes gént, vagy behelyezzenek — bekopogjanak-az egér genomjának egy adott helyére. A Rosa26 lókusz hasznos hely egy gén behelyezéséhez, a beillesztés helye ismert — nem véletlenszerű—, és lehetővé teszi a tudósok számára, hogy tanulmányozzák a gént anélkül, hogy befolyásolnák más gének működését.

az ezt a lokuszt használó Kopogtató modellek nagyobb pontosságot és reprodukálhatóságot biztosítanak az eredményeknek. Hagyományosan ezeket a kopogtató egereket egér embrionális őssejtekkel hozták létre, és ez a folyamat a CRISPR technológia megjelenésével hatékonyabbá vált. A Biocytogen szabadalmaztatott CRISPR / Cas9-alapú Extrém genomszerkesztési (EGE) rendszerét használja, hogy gyorsabb eredményeket érjen el a homológ rekombináció 10-20-szoros növelésével.

Miért Használják A Rosa26-Ot?

a DNS-ben való könnyű kopogás miatt a rosa26 lókusz az egér 6.kromoszómáján nagyon hasznos a tudósok számára. Mivel ez a lokusz egy nem lényeges RNS-t kódol, nem pedig egy kritikus funkciót ellátó gént, az inszercióknak nincsenek káros hatásai. A helyszín stabil jellege és a tudósok azon képessége, hogy ellenőrizzék a globális vagy feltételes génexpressziót, a Rosa26 egérmodellt sokoldalú genetikai eszközzé teszik.

vizsgálati sejtvonalak

 vizsgálati sejtvonalak

vizsgálati sejtvonalak

egy riporter gén hozzáadásával a kutatók nyomon követhetik a sejtvonalakat. A gének egész vonalon történő követésének képessége lehetővé teszi egy alaposabb tanulmányt arról, hogy a genetikai kód hogyan halad le és fejezi ki magát generációk során.

a riportert toxinnal helyettesítve a tudósok képesek a sejtvonalakat eltávolítani. A gének kiütése az egyik módszer annak tanulmányozására, hogy bizonyos gének hiánya hogyan befolyásolja a szervezetet. Egy ilyen tanulmány különösen hasznos a génfunkció azonosításában annak hiánya révén.

a génexpresszió tanulmányozása az egész testben

a Rosa26 helyre beillesztett gének magas szintű expressziója kívánatossá teszi a kutatók számára. Egy 1997-es vizsgálat során a Rosa ons Retrovírussal fertőzött embrionális őssejtekből származó egereken expressziót mutattak a test minden szövetében.

Chimera Analysis

a Chimera analysis a Rosa26 egér másik alkalmazása. Az ilyen vizsgálatok két zigóta egerét vizsgálják, amelyek sejtjeikben különböző genotípusú állatokat hoznak létre. Egyes állatok a különböző genotípusok kifejeződését mutatják szőrmintájukban vagy sejtjeikben.

a Rosa26 egerek egész sejtjeikben expresszálják a ons-galaktozidázt. Mint ilyen, a tudósok rosa26 sejteket használhatnak jelölt vad allélként. Ezeknek a sejteknek a mutáns sejtekkel való keresztezése jelzi azokat a megváltozott sejteket. Ezek a rosa26 helyről származó markerek különböző genotípusokat jelezhetnek a kimérán belül.

Kopogtatásból származó homozigóták vizsgálata

míg a kombinált genotípusú egerek hasznosnak bizonyulnak a vizsgálatban, addig a rosa26 helyén lévő gén kopogtatásából származó egyes genotípusú egerek szintén hasznosak. Az ezt a lokuszt használó kísérletek során a termelt homozigóták életben maradnak, bár kevés számban. Ezen egerek életképessége biztosítja a hozzáadott gén eredményeinek hosszabb vizsgálatát a Rosa26 helyen.

vizsgálja meg az embrionális sejtek differenciálódását

a Rosa26 helyszínen a tudósok stabil sejtvonalakat hoztak létre, amelyek tartalmazzák a protein-kináz A-T, A CA-PKA-t. Amikor a sejtek túlexpresszálták a PKA-t, nagyobb differenciálódást és érképződést mutattak. A kutatók azt állították, hogy a célgének behelyezése a Rosa26 helyre lehetővé tenné számukra, hogy jobban tanulmányozzák, hogyan változnak az embrionális sejtek specifikus testsejtekké.

vizsgálja meg a gének betegségre gyakorolt hatását

 vizsgálja meg a gének betegségre gyakorolt hatását

vizsgálja meg a gének betegségekre gyakorolt hatását

az egyik oka annak, hogy a tudósok Rosa26 kopogtatási vizsgálatokat végeznek, hogy megvizsgálják, hogyan befolyásolja egy gén a betegség kialakulását. Számos betegség gyanítja a genetikai kapcsolatokat, és ezeknek a géneknek a genomból történő hozzáadása vagy kivonása meghatározhatja, hogy egy adott gén vagy csoport szerepet játszik-e olyan állapotok kialakulásában, mint a cukorbetegség vagy az Alzheimer-kór. például a kutatók Rosa26 Kopogtató egereket használtak annak vizsgálatára, hogy a Met receptor tirozin-kinázok (RTK) hogyan befolyásolták az amiotróf laterális szklerózis (ALS) kialakulását. Ez a tanulmány megállapította, hogy az egerekben a Met RTK növelése nem volt hatással a motoros neuronok fejlődésére. Azonban lassította a motoros neuronok elvesztését, késleltette az ALS kialakulását és meghosszabbította az ALS-sel rendelkező egerek életét.

a helyszín tanulmányozása különböző fajokban

ennek a lokusznak egy másik hasznos aspektusa a különböző fajokban való jelenléte. Bár a Rosa26 lókuszt eredetileg egerekben jellemezték, az emberekben, sertésekben, patkányokban, egerekben és nyulakban is jelen van. 2018-ban a kutatók sikeresen azonosították a szarvasmarhák Rosa26 helyét. Annak bizonyítására, hogy a rosa26 biztonságos kikötő a szarvasmarhákban, a kutatók géneket illesztettek be ebbe a lókuszba, és létrehoztak egy sejtvonalat a jövőbeni vizsgálatok során.

a Rosa26 lokusz vizsgálata emberekben

míg az egerekben végzett génbeillesztések tanulmányozása elősegítheti a jövőbeni humán genetikai kutatásokat, a Rosa26 emberben történő alkalmazása még nem lehetséges. Az egerek elhelyezkedésétől eltérően az emberekben a Rosa26 közel áll a kritikus génekhez. A Rosa26 lókusz génszerkesztése emberben tehát megzavarhatja ezen más gének működését. Mivel a gének ezen a helyen történő hozzáadásának hatása az emberekre ismeretlen hatásokkal járhat, a Rosa26 nem biztos, hogy biztonságos kikötő beillesztési hely az emberekben. Az AAVS1 azonban biztonságos kikötő lokusz az emberi genomban.

a Rosa26 Kopogtató Egerek további előnyei

a Rosa26 lokusz számos előnyt kínál a genom más helyeivel szemben, így ideális lehetőség a helyspecifikus génbeültetésre.

kevesebb egérre van szükség

mivel a tudósok ismerik a gének beillesztésének konkrét helyét, kevesebb egérre van szükségük a sikerhez. A kevesebb egér iránti igény csökkenti a szükséges erőforrásokat és időt, lehetővé téve további vizsgálatokat más területeken.

magasabb sikerességi arány

transzgenikus egerekben a DNS véletlenszerűen integrálódik a genomba, és a transzgén kópia száma változó. A Rosa26 lokusz megcélzásakor a tudósok nagyobb sikereket érnek el az ismert hely és az eredmények nagyobb kiszámíthatósága miatt a régebbi transzgén technológiához képest.

stabil hely

genetikai inszerciók nem végezhetők el az egér genomjának egyetlen helyén sem, mivel egyes helyek kritikus funkciójú fehérjéket kódolnak. Ezzel szemben a Rosa26 lókusz egy biztonságos kikötő, amely nem zavarja a gén működését. Ezért mutációkkal vagy fluoreszcens riporterekkel rendelkező gének beillesztése a Rosa26 lókuszba lehetővé teszi az új gén interferencia nélküli expresszióját.

az eredmények reprodukálhatósága

számos alapító (F0 generációs) egeret állítanak elő transzgenikus modell előállítása során. Ezeknek az alapítóknak azonban eltérő genetikai eredményeik voltak, és szinte lehetetlen volt reprodukálni őket. Ennek a kérdésnek egy része a transzgén példányszámra és az egyes modellek loci különbségeire vonatkozik. A Rosa26 esetében a tudósok külön lokusszal rendelkeznek, amely lehetővé teszi számukra és más kutatóknak a kísérleti eredmények reprodukálását.

expressz Célgén a Sejtdifferenciálás után

 expressz Célgén a Sejtdifferenciálás után

expressz Célgént a sejtek differenciálódása után

végül az embrionális sejtek különböző testsejtekké differenciálódnak, amelyek a szöveteket, a vért, a szerveket, a csontokat és a test más részeit alkotják. A Rosa26 hely használata és egy célgén behelyezése esetén a gén expressziója megjelenik a sejtekben ezen differenciálódási esemény után.

ez a széles körben elterjedt kifejezés megmagyarázza, hogy még a génszerkesztési módszerből származó felnőtt egerek is mutatják a mutáció tulajdonságait. A gén azon képessége, hogy nyomon kövesse a különféle sejtváltozásokat, ideálissá teszi azokat a tudósokat, akik meg akarják vizsgálni, hogy a sejtek hogyan változnak a szervezet életében a magzattól a felnőttig.

hogyan hoznak létre a tudósok Rosa26 KI egereket?

gének beillesztése a Rosa26 lókuszba célzott embrionális őssejtek felhasználásával vagy a CRISPR/Cas9 rendszeren keresztül valósítható meg. Egy floxolt szekvencia, amely gyakran tartalmaz neomicint, egy érdekes gén előtt helyezkedik el, hogy megakadályozza annak átírását, majd expresszálását.

a feltételes kifejezéshez a tudósok a Cre-lox rendszert alkalmazzák. A feltételes “floxolt” egér keresztezése a Cre rekombinázt expresszáló egérrel törli a floxolt szekvenciában található DNS-szekvenciákat. A loxp-3xstop-LoxP nélkül a gén előtt a gén átírható. Amíg ez a Cre deleter eltávolítja a stop funkciót, a sejt normálisan viselkedik a gén expresszálása nélkül. Ezzel a feltételes kopogtatási módszerrel a tudósok ellenőrizhetik, hogy a gének különböző sejtekben vagy szövetekben expresszálódnak-e.

jellemzően a behelyezett kazetta tartalmaz egy riportert is a gén expressziójának nyomon követésére. Ennek a lokusznak a számos tanulmányában a tudósok a Lacz-t, egy bakteriális gént használták riporterként, Mert hacsak nem integrálódik exonokba vagy intronokba, nem termel expressziót. Ha megengedik, hogy kifejezze magát, a lacZ minden felnőtt szövetben elősegíti a GmbH‐galaktozidáz expresszióját.

a CRISPR/Cas9 technológia jobb használata lehetővé teszi a tudósok számára, hogy ezt a módszert is használják a rosa26 helyén lévő gének kopogtatására. A zigóták injektálásának régebbi eszközeivel összehasonlítva a CRISPR magasabb sikerarányt hozott létre. A régebbi módszerek csak az élő alapító mutánsok 10-20%-át eredményezték, míg a CRISPR által termelt egerek életképessége és mutációja 50% – os sikert mutatott.

a CRISPR RNS (crRNS) és a TRACER RNS (tracrrns) egyaránt kötődik egymáshoz és a célgénszekvenciához. A folyamat crRNS-t igényel a DNS azonosításához a szekvenciában, míg a Cas9 fehérjéknek tracrrns-re van szükségük tevékenységükhöz.

a CRISPR, a crRNS, a tracrrns, a Cas9 és a célzási vektor segítségével egy kopogtató egér létrehozása az egér zigótájába kerül. A 2 RNS a Cas9 nukleázt a genom egy meghatározott helyére irányítja (pl. Rosa26), a Cas9 pedig megszakítja a kettős szálat. A sejt megjavítja a törött DNS-t egy úgynevezett folyamattal homológia-irányított javítás (HDR). A célvektoron belül érdekes gének beépülnek vagy beillesztésre kerülnek a Rosa26 lókuszba. A Biocytogen EGE rendszere felgyorsítja a HDR-t, ezért csökkenti az F0 egerek szűrésének idejét.

az eredmények pontosságának ellenőrzése érdekében a Southern blot analízis biztosítja a véletlenszerű Beillesztések szűrésének elsődleges eszközét. Mivel a célzási vektor véletlenszerű beillesztéseket eredményezhet a CRISPR projektek 32% – ában, a Southern blot elemzés kritikus eszközzé válik a késztermékek tesztelésében. Ezzel a teszttel a génben lévő pozíció és kópiaszám pontosságát ellenőrzik.

miért használja a Rosa26 egereket a kutatásában?

rosa26 egerek kutatáshoz

az egér genetikai modelljeit használó kutatóintézetek esetében az eredmények megbízhatósága döntő szerepet játszik az állatok forrásának eldöntésében. Az eredmények ellenőrzése, a sikerek hosszú nyilvántartása és számos elégedett ügyfél a Rosa26 egerek és más genetikai szolgáltatások minőségi forrásának jelei.

a Biocytogen képes előállítani a Rosa26 beütéses és feltételes beütéses egereket, hogy segítse a kutatókat a tudományos kérdések megválaszolásában. Szolgáltatók és innovátorok vagyunk. Szabadalmaztatott EGE módszerünk felgyorsítja a HR-t a gyorsabb eredmények érdekében a pontosság feláldozása nélkül. Egyetlen központi létesítmény vagy szállító sem rendelkezik ezzel az előnnyel.

a Biocytogen 100% – os elégedettségi garanciát kínál. További információ a testreszabott megoldásokról vagy a Rosa26 egerek létrehozásának folyamatáról, lépjen kapcsolatba velünk.

Megosztás:

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.